Методика спектрофотометрического определения хлорофилла
Определение концентрации хлорофилла используется для оценки качества воды и в целях экологического мониторинга. Методика таких исследований заключается в применении фотометра для изучения спектральных характеристик проб. Она применяется органами государственного экологического контроля, научно-исследовательскими организациями, а также при промысловых работах.
Оборудование
Для проведения анализа необходим фотометр со спектральным диапазоном не меньше, чем 430-750 нм и точностью установки длины волны в пределах 2 нм. Примером такого устройства является прибор В-1200 с чувствительностью в один нанометр. Дополнительно потребуются лабораторная центрифуга, фильтровальный аппарат с возможностью установки мембранных элементов, измельчитель, вакуумный насос и стерильные ёмкости.
Принцип
Методика основана на регистрации разницы спектров поглощения исследуемых проб воды с эталонными. Образцы для сравнения берутся с поверхности источника и с глубины так называемой эвфотной зоны, где практически отсутствует растительность. Контрольная проба также может быть получена путём удаления хлорофилла из части исследуемой воды.
Технология работы
Изучаемый образец пропускают через мембранный фильтр, покрытый измельчённым порошком углекислого бария. Получившийся осадок просушивается и подвергается гомогенизации путём растирания. Затем к нему добавляют ацетон концентрацией 90% и выдерживают при комнатной температуре 30 минут. Иногда также применяют ультразвуковой способ гомогенизирования.
Пробирку с раствором помещают в центрифугу. При скорости вращения 8000 оборотов в минуту из экстракта удаляют светорассеивающие примеси. Оптическую чистоту контролируют на длине волны 750 нм. Затем образцы помещают в кюветы для спектрофотометрирования. Измерения проводят дважды: сначала оригинальный раствор, потом после добавления нескольких капель соляной кислоты. Полученные результаты обрабатывают с помощью специальных формул и получают значение концентрации хлорофилла в исследуемых пробах.
