Анализ однокомпонентных систем фотометрическим методом

Одним из наиболее востребованных методов количественного определения веществ в аналитической химии является фотометрия. Медицинские, экологические, производственные, экспертные лаборатории выполняют серийные и разовые анализы для решения различных задач.

Метод основан на законе Бугера-Ламберта-Бера, согласно которому концентрация вещества в растворе прямо пропорциональна его оптической плотности. То есть, чем больше исследуемого вещества находится в растворе, тем больше он окрашен. В современной химии практически для каждого известного вещества подобрана цветная реакция, позволяющая получить подходящий для измерения раствор.

Погрешность фотометрических измерений обычно не превышает 1-2%.

Однокомпонентные системы

Практически все исследуемые материалы представляют собой многокомпонентные системы, состоящие из большого количества веществ, часть которых может мешать определению исследуемого.

Например, в сыворотке крови измеряют содержание белков и их фракций, различных ферментов, липидов, пигментов, электролитов и пр. Для этого пробу помещают сразу в раствор реактива и через определенное время измеряют, либо проводят через серию предварительных реакций, необходимых для удаления мешающих компонентов.

Так, количество общего белка определяют по степени фиолетового окрашивания изначально голубого биуретова реактива. Расчет делают по калибровочному графику, полученного измерением проб с известным содержанием белка в возрастающей концентрации относительно реактива. Современные анализаторы и спектрофотометры, например, В 1200 или В 1100 легко программируются и самостоятельно рассчитывают готовый результат.

Установление области концентраций

Для большинства рутинных анализов существуют давно известные методики и готовые наборы реагентов, позволяющие выполнять серийные исследования.

Их разработка состоит в правильном подборе соотношения компонентов смеси и подходящей длины волны для того, чтобы в измеряемой области выполнялся основной закон светопоглощения, чем обеспечивается правильность измерения и чувствительность метода.